Хистология

Хистологичен препарат под микроскоп

Патохистологична лаборатория

Работейки като хистологичен лаборант в лаборатория Клинична патология и цитология много мои близки и приятели не разбираха какво всъщност правя. Това беше първата ми работа по специалността и много ценен за мен опит. Повечето хора свързват медицинския лаборант само с вземането на кръв за изследване. А това е една много малка част от работата на лаборанта. Той също така изследва тези проби. Изследват се не само кръвни проби, а и много други видове биологичен материал. Например в хистологията се изследват тъкани. Могат да се вземат при операция или други медицински манипулации. Наричат се биопсии. Изследват се тъкани и на починали, които се вземат при аутопсия. Те се наричат некропсии. След вземането тъканта максимално бързо трябва да се постави във формалин.Целта е да се фиксира, за да може структурата на клетките и строежа на тъканите да се запазят. Това е необходимо, защото под действие на различни ензими започва процес на автолиза (разрушаване на клетките). Според размерите на материалите, които могат да бъдат много малки късчета тъкан до цели органи, те престояват във фиксиращата течност различен период от време. Съществуват много видове фиксатори, но универсалния  такъв е формалина. Той има свойството лесно да прониква в тъканите и да запазва строежа и формата им с години. Патологът поставя диагнозата наблюдавайки тъканите и клетките под микроскоп. За да се стигне до това трябва от биопсията на пациента да се изготви микроскопски препарат. Това е дълъг процес и изисква време. Първо патологът прави макроскопски оглед на материала като описва размерите, формата, цвета, наличието на туморна формация и други. Преценява коя част от материала ще се изследва, след което нарязва тази част на малки парчета, които се поставят в специални хистологични касетки.

Хистологични
касетки

Следва тъканна обработка на материала извършваща се в апарат наречен хистокинет.

Хистокинет

Хистокинет

Апарата има контейнери за реактиви, в които се поставят касетките. Те преминават последователно през серия алкохоли и ксилол. Целта е дехидратиране, извличане на мазнините и просветляване на материалите. Последната стъпка в хистокинета е пропиване с парафин. За целта касетките престояват няколко часа в разтопен парафин. Той играе роля на включваща среда, топи се на около 56°C, а на стайна температура се втвърдява. След като тъканта е импрегнирана с парафин се излива т. нар.парафиново блокче. В метални формички се налива разтопен парафин и на дъното с помощта на топли пинцети се поставят парченцата тъкан.

Парафинови блокчета

 
Оставят се да изстинат и втвърдят. След престой в хладилник готовите блокчета с включените и пропити в тях парченца тъкан се режат на специален уред наречен микротом. Целта е да се получат много тънки срези около 4 - 5 микрона, което позволява наблюдението под светлинен микроскоп на единични слоеве клетки. Само за сравнение човешкия косъм е с дебелина около 20 микрона.

Микротом

Срези на микротом

 Парафиновото блокче се закача за микротома и с помощта на специален нож фиксиран за уреда се изрязват серия от срези съдържащи материала за изследване. Тези лентички се поставят веднага във ваничка с топла вода, за да се разпънат добре. След това се улавят с предметно стъкло. Така вече имаме много тънки срези от материала за изследване върху стъклото.

Топла вана

 

Срези от материал
за изследване

Следва отнемане на парафина като поставяме предметните стъкла върху нагорещена плоча, за да се разтопи. Пълното депарафиниране се извършва в редица ксилоли, след което предметните стъкла преминават през серия алкохоли и вода.

Оцветяване на препарати

Последната стъпка е оцветяването на препаратите. Според вида на тъканта има различни специфични оцветявания. Рутинното оцветяване в хистологията е хематоксилин - еозин, при което ядрата и цитоплазмата на клетките се наблюдават в определен цвят. След оцветяването следва т. нар. включване.Това е покриване с предметно стъкло, което се залепя с безцветно лепило, при което се получава траен микроскопски препарат.

Препарати и
парафинови блокчета

Готови препарати

Под микроскоп

Така изготвените препарати могат да се съхраняват с години. Парафиновите блокчета също се архивират. Съхраняват се на стайна температура и могат да се използват за допълнителни изследвания на материала. Според стандарта “Обща и клинична патология” блоковете и стъклата се съхраняват в продължение на 20 години. Всеки пациент може да си вземе материалите от лабораторията, в която са изследвани и да потърси второ мнение от друг патолог.

Криостат

Друго изследване в хистологичната лаборатория е т. нар. гефрир. Това е спешно изследване предимно по време на оперативно отстраняване на туморна маса. Целта е да се постави бърза диагноза, която ще определи обема на операцията. Или казано простичко дали тумора е доброкачествен или злокачествен. Пациента е на операционната маса и екипа трябва да получи резултата до 30 минути. Фиксацията и последващата обработката на тъканите изискват технологично време от няколко дни. При спешното изследване обаче материала е свеж и за забавяне процесите на автолиза се използва много ниска температура т. е. замразяване. Извършва се в специален апарат наречен криостат. Представлява хладилна камера замразяваща до -60°С с вграден микротом. Парченце от тъканта се замразява в криостата за около 1-2 минути. С помощта на вградения в камерата микротом се режат тънки срези, които се поставят върху предметно стъкло и веднага се оцветяват. Патологът наблюдава готовите препарати под микроскоп и съобщава резултата на екипа в операционната зала.

По-специфични изследвания в патологията са хистохимичните и имунохистохимичните. Хистохимията се използва за доказване на определени вещества в клетките - липиди, ензими, полизахариди и други. За целта се използват специфични оцветявания. А имунохистохимията е метод за диагностика използван при много онкологични заболявания. Чрез него се доказва първичното огнище, определя се точното лечение и прогнозата на болестта. Извършва се върху много тънки срези от 3 микрона. Препаратите се обработват за антигенно възстановяване на туморните клетки, след което се накапват с реактиви съдържащи антитела. Преминават през специфично оцветяване и се отчитат на микроскоп.

В патохистологичната лаборатория се извършва и цитологично изследване.

Цитонамазки

Изследват се както пунктати от различни телесни кухини така и вагинални цитонамазки. Гинеколозите правят намазки върху предметно стъкло, които след това отнасят в хистологичната лаборатория. След изсъхване предметните стъкла се оцветяват чрез специфичен метод, а патолога наблюдава клетките под микроскоп и дава резултат или поставя диагноза.